佐助是火之国木叶隐村宇智波一族的天才忍者之一，与漩涡鸣人、春野樱为木叶忍者学校的同期学员，三人后被分配到卡卡西所带领的第七班。
佐助在平日里会给人一种冷酷，不易接近的感觉，在自我介绍时，佐助表示自己讨厌的东西很多，没什么喜欢的东西，他的目标是对宇智波鼬展开复仇，以及重振宇智波一族。
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佐助一开始对队友漠不关心，不会搭理鸣人的挑衅，对小樱的善意举动也很冷淡。当第七班的三人在卡卡西的铃铛测试中，佐助在关键时刻对卡卡西使用了宇智波一族的招牌的火遁忍术，只可惜最后没有击中卡卡西。
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在中忍考试期间，为了让自己变得更强，佐助接受了卡卡西的特训，同时通过写轮眼复制了小李的动作，提升了自己的体术能力，还学会了原创忍术——千鸟。
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在正式比赛中，佐助的高速移动让我爱罗陷入苦战，不得不用沙子将自己全身包围起来。佐助趁此机会首次使用千鸟，结果成功破解我爱罗的绝对防御，并打伤了我爱罗。
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学会了千鸟还不足以向宇智波鼬展开复仇，为了追求更强的力量，佐助决定离开木叶，启程跟随大蛇丸修行。
在路途中佐助遇到了前来阻止他的鸣人，佐助在这场战斗中，直接变成咒印状态，外貌形似一只鹰，二人在终末之谷展开了激战。
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最后战斗以佐助的胜利而告终，但佐助并未杀死鸣人，佐助决定用自己的方式获得力量，不想像鼬所希望的那样，为了开启万花筒写轮眼而杀害同伴。
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在两年的时间里，佐助的实力得到提升。他使用草薙剑作为武器，并对雷遁忍术进行了各种新开发，习得了多种忍术，刀法也练得炉火纯青，同时还能将雷属性的查克拉注入到武器中，以提升自身的攻击能力，瞳力也变得深不可测。
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过了一段时间后，鼬完成了一系列的布置和安排，佐助在鼬的指示下，两人约定在宇智波一族的故地进行决战。兄弟二人的战斗异常激烈，最后佐助使用了自创的S级忍术“麒麟”，想直接击杀鼬。可千钧一发之际，鼬展现了前所未有的力量，开启了“须佐能乎”，以绝对的实力击溃了佐助。
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但此时的鼬身患重病，加上用尽了全部的力气，最后倒在了佐助的面前，这场兄弟对决的结果以佐助的胜利宣告结束，佐助的复仇也终于完成了。
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佐助通过神秘面具男得知了宇智波一族与木叶曾经的恩怨，以及鼬的真实身份与灭族真相。佐助得知真相后开始慢慢回忆起鼬的过往，愤怒与悲伤使得他开启了万花筒写轮眼。此时佐助又有了新的目标——向木叶复仇。
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为了实现这个目标，佐助需要借助晓的力量。佐助带领的鹰小队和晓达成了暂时的合作关系，作为条件，鹰小队需要捕捉八尾人柱力“奇拉比”。来到云隐村与奇拉比交手后，鹰小队全员都不敌奇拉比，陷入了苦战。最后关头，依靠佐助的天照，结束了这场恶战。
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“鹰小队”在经过一番休整后决定向木叶发起进攻，途中却被神秘面具男告知木叶已被摧毁，佐助将目标变为潜入五影大会，准备刺杀代理火影的志村团藏。
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佐助闯入五影会谈，想要刺杀代理火影的志村团藏，可惜被团藏逃脱了，但佐助紧追不舍，在神秘面具男的帮助下，追到了团藏。
佐助质问团藏关于鼬的真相，在团藏说出真相、称鼬为木叶叛徒后彻底怒火爆发，两人开始对决，佐助不断使用天照、须佐能乎等招数攻击团藏，最后成功将团藏击倒。
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佐助是一个爱与恨的交织体，有爱才有恨。然而恨之中，又包含着浓重的爱意以及憧憬。
在7月23日这一天，我们为你点亮生日蜡烛，希望在黑暗中前行的你，可以看见前方的烛光，也希望生日的烛火，可以取代复仇的天照之火，希望你能够开心地享受属于你的一天，宇智波佐助，生日快乐！
拥有天才与帅气之名
才貌双全，外冷内热
敏感而不善于表达
具备超强能力和智力的战斗天才
背负着宇智波之名
却是宇智波一族的最后的幸存者
迈向永无止境的黑暗
成为了孤独的复仇者
用双眼把黑暗看得一清二楚
